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前言

免疫檢查點(diǎn)抑制劑的出現(xiàn)在腫瘤免疫治療領(lǐng)域取得了巨大的成功，但大多數(shù)患者仍然未能獲得理想的臨床反應(yīng)。人們提出了許多關(guān)于免疫治療抵抗的解釋，包括低抑制性受體（IR）配體表達(dá)，新表位的低免疫原性，高腫瘤負(fù)荷與炎癥反應(yīng)比以及免疫排斥等。

檢查點(diǎn)阻斷療法的廣泛作用機(jī)制是通過(guò)IRs逆轉(zhuǎn)固有的T細(xì)胞抑制。這些藥物干擾了腫瘤微環(huán)境（TME）中CD8＋T細(xì)胞表達(dá)的IRs與相應(yīng)配體的結(jié)合，從而促進(jìn)了效應(yīng)T細(xì)胞細(xì)胞因子的產(chǎn)生和T細(xì)胞對(duì)刺激的反應(yīng)增殖。另一方面，IR阻斷對(duì)TME中免疫抑制細(xì)胞（尤其是Treg細(xì)胞）功能的細(xì)胞內(nèi)在影響值得進(jìn)一步研究。盡管CTLA－4、TIGIT、和TIM標(biāo)記了更多抑制性的Treg細(xì)胞，但PD1和LAG3的作用是模棱兩可的，并且可能與具體情況有關(guān)。最近的一篇論文表明，抗PD1治療可使治療中進(jìn)展過(guò)度的患者體內(nèi)的PD1＋Treg細(xì)胞恢復(fù)活力。因此，對(duì)于該領(lǐng)域來(lái)說(shuō)，檢查點(diǎn)阻斷如何協(xié)調(diào)促進(jìn)CD8＋T細(xì)胞激活和加強(qiáng)Treg細(xì)胞抑制之間的平衡是至關(guān)重要的。

近年來(lái)，神經(jīng)纖毛蛋白－1（neuronilin－1，NRP1）因其強(qiáng)大的雙重功能：增強(qiáng)Treg細(xì)胞抑制和限制CD8＋T細(xì)胞的持久反應(yīng)，在免疫腫瘤學(xué)領(lǐng)域引起了廣泛的關(guān)注。盡管最初被認(rèn)為是一種Treg細(xì)胞標(biāo)志物，新的研究表明NRP1不僅對(duì)TME中固有的Treg細(xì)胞穩(wěn)定性是必需的，而且它還顯著地抑制CD8＋T細(xì)胞的抗腫瘤功能。另外，它在髓系細(xì)胞亞群中也高度表達(dá)，但其在這方面的功能不太明確。已有的臨床前結(jié)果進(jìn)一步證明NRP1拮抗作用與已建立的免疫療法相結(jié)合的可行性。NRP1在TME中作為一個(gè)關(guān)鍵的免疫調(diào)節(jié)劑具有誘人的開(kāi)發(fā)前景。

NRP1的基礎(chǔ)生物學(xué)

神經(jīng)纖毛蛋白（neuronilins，NRPs）是一種單次跨膜、非酪氨酸激酶表面糖蛋白，在所有脊椎動(dòng)物中都存在，在物種間高度保守。已知存在兩種同源的NRP亞型，即NRP1和NRP2，由不同的基因編碼，這兩種NRP最初被發(fā)現(xiàn)為神經(jīng)元粘附分子。后來(lái)發(fā)現(xiàn)它們與血管生物學(xué)有關(guān)，正常胚胎血管發(fā)育需要NRP1和NRP2參與小淋巴管和毛細(xì)血管的形成。過(guò)去10年的研究表明，NRP是一種多功能蛋白質(zhì)，參與除神經(jīng)和血管發(fā)育以外的多種生物過(guò)程，其中NRP1起在免疫和腫瘤發(fā)生中起主要作用。

NRP1蛋白由一個(gè)長(zhǎng)的N端胞外結(jié)構(gòu)域組成，接著是一個(gè)跨膜區(qū)和一個(gè)由43－44個(gè)氨基酸組成的非常短的胞內(nèi)區(qū)。細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域由三個(gè)主要片段組成，即兩個(gè)CUB（補(bǔ)體C1r／C1s，Uegf，骨形態(tài)發(fā)生蛋白1）結(jié)構(gòu)域（表示為a1／a2）和兩個(gè)凝血因子V／VIII結(jié)構(gòu)域（表示為FV／VIII或b1／b2），然后是MAM（與meprin蛋白酶同源，A5抗原，受體酪氨酸磷酸酶μ和К）結(jié)構(gòu)域（表示為“c”）。CUB結(jié)構(gòu)域是連接信號(hào)素配基所必需的，而FV／VIII結(jié)構(gòu)域負(fù)責(zé)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）的結(jié)合以及不同配體（如信號(hào)素和VEGF）的對(duì)接位點(diǎn)。已知MAM結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)受體的同源二聚或異源二聚。盡管最初人們認(rèn)為NRP1是一個(gè)非信號(hào)受體，因?yàn)樗�的胞�?nèi)區(qū)很短，但后來(lái)發(fā)現(xiàn)c端保守的PDZ（PSD－95／Dlg／ZO－1同源性）結(jié)構(gòu)域結(jié)合基序（SEA）與GAIP相互作用蛋白c－末端／synectin結(jié)合，后者介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳遞和受體內(nèi)化。

NRP1能夠與廣泛的配體結(jié)合，解釋了其多樣的生物學(xué)功能。NRP1首先被確定為分泌的III類信號(hào)素的共同受體，如信號(hào)素3A（Sema3A），后來(lái)發(fā)現(xiàn)NRP1與多種生長(zhǎng)因子結(jié)合，最顯著的是VEGF1，以及其他包括轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β、血小板衍生生長(zhǎng)因子C和D、和C－Met。有趣的是，最近的研究表明，NRP1還與細(xì)胞外microRNA／AGO2復(fù)合物結(jié)合并促進(jìn)其內(nèi)部化，增加了NRP1調(diào)節(jié)細(xì)胞功能的另一種機(jī)制。

免疫系統(tǒng)中的NRP1

髓系細(xì)胞

NRP1在人類和小鼠的中樞神經(jīng)和血管系統(tǒng)中廣泛表達(dá)于多種組織和細(xì)胞中，而NRP1在免疫系統(tǒng)中的表達(dá)受到更多的限制和調(diào)節(jié)。NRP1被鑒定為人類樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）的標(biāo)志物，稱為血液DC抗原4（BDCA4，或CD304），在所有漿細(xì)胞樣DC（pDCs）中均有表達(dá)。pDCs被稱為“專業(yè)的”I型干擾素（IFN）產(chǎn)生細(xì)胞型，當(dāng)用抗NRP1抗體治療時(shí)，顯示人類pDCs病毒感染時(shí)IFN－α釋放減少，提示NRP1在抗病毒免疫中具有免疫調(diào)節(jié)作用。其他表達(dá)NRP1的抗原呈遞細(xì)胞（APC）包括單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，尤其是幾種組織內(nèi)的巨噬細(xì)胞，例如小膠質(zhì)細(xì)胞和脂肪組織巨噬細(xì)胞（ATM）。單核細(xì)胞／巨噬細(xì)胞NRP1的表達(dá)通常被認(rèn)為是促血管生成和抗炎的，因此有助于組織重塑和傷口愈合。在最近的一份報(bào)告中，發(fā)現(xiàn)NRP1＋ATM可通過(guò)維持葡萄糖動(dòng)態(tài)平衡來(lái)預(yù)防肥胖和代謝綜合征。

T細(xì)胞

在適應(yīng)性免疫中，NRP1被認(rèn)為是小鼠胸腺源性Treg（tTreg）細(xì)胞的標(biāo)記物，盡管這并不適用于人類Treg細(xì)胞。相反，NRP1在靜止的CD4＋輔助性T細(xì)胞和CD8＋T細(xì)胞上表達(dá)非常低。在抵抗實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦炎（EAE）的小鼠模型中，NRP1在EAE耐受性CD4＋T細(xì)胞（同時(shí)在Foxp3＋和Foxp3－）中上調(diào)，并在功能上促成其抑制表型。其他報(bào)告有NRP1表達(dá)的T細(xì)胞亞群包括T濾泡輔助細(xì)胞和IL－17表達(dá)的不變自然殺傷性T細(xì)胞。最后，NRP1在人類胸腺上皮細(xì)胞（TEC）上結(jié)構(gòu)性表達(dá)，在TEC與胸腺細(xì)胞接觸期間上調(diào)未成熟胸腺細(xì)胞，隨后被Sema3A阻斷以引導(dǎo)胸腺細(xì)胞遷移。

髓系細(xì)胞－T細(xì)胞相互作用

NRP1也由從人類外周血中分離出來(lái)的傳統(tǒng)樹(shù)突狀細(xì)胞表達(dá)，它可能通過(guò)同型相互作用介導(dǎo)樹(shù)突狀細(xì)胞和T細(xì)胞之間免疫突觸的形成來(lái)促進(jìn)早期T細(xì)胞啟動(dòng)。由于Treg細(xì)胞優(yōu)先表達(dá)NRP1，在沒(méi)有炎癥或外來(lái)抗原暴露的情況下，Treg細(xì)胞通過(guò)NRP1–NRP1相互作用使DC在免疫突觸上的作用時(shí)間更長(zhǎng)，這是一種維持免疫耐受處于穩(wěn)態(tài)的機(jī)制。此外，在移植的情況下，細(xì)胞膜蛋白從APCs轉(zhuǎn)移到T細(xì)胞，稱為trogocytosis，通過(guò)幾種已知的NRP1配體（如Sema3A和VEGF）使CD4＋T細(xì)胞對(duì)抑制信號(hào)敏感。此外，VEGF作為一種免疫抑制細(xì)胞因子，可以以NRP1依賴的方式抑制脂多糖誘導(dǎo)的DC成熟。

總之，很明顯，NRP1介導(dǎo)重要的免疫調(diào)節(jié)功能，包括自我耐受和免疫穩(wěn)態(tài)，類似于一些已知的IRs的活性。然而，NRP1與經(jīng)典IRs的區(qū)別在于，它對(duì)多種細(xì)胞類型，特別是免疫抑制細(xì)胞產(chǎn)生這樣的影響。這些特征強(qiáng)調(diào)了為什么在癌癥的背景下檢查NRP1的功能可能是改進(jìn)免疫治療的關(guān)鍵步驟。

NRP1在小鼠和人TME中的表達(dá)和功能

NRP1與癌癥之間已建立的聯(lián)系得到了三個(gè)關(guān)鍵的觀察結(jié)果的支持：（1）NRP1在多種人類癌癥類型的惡性細(xì)胞中高表達(dá)；（2）NRP1在TME中大量表達(dá)，包括基質(zhì)細(xì)胞和免疫細(xì)胞；（3）NRP1的表達(dá)通常與不良的臨床預(yù)后相關(guān)。從腫瘤細(xì)胞的角度來(lái)看，NRP1通過(guò)多種功能支持腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，包括細(xì)胞存活、新生血管生成和轉(zhuǎn)移。

在腫瘤－免疫界面，NRP1通過(guò)在TME的免疫室中協(xié)調(diào)多種抑制過(guò)程來(lái)促進(jìn)免疫逃避。一方面，NRP1在樹(shù)突狀細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中的生理作用，有助于這些細(xì)胞的抗炎表型，被腫瘤“劫持”以促進(jìn)腫瘤血管生成和腫瘤相關(guān)免疫抑制。另一方面，NRP1直接影響適應(yīng)性抗腫瘤免疫，這是通過(guò)調(diào)節(jié)腫瘤內(nèi)Treg細(xì)胞和CD8＋T細(xì)胞的細(xì)胞外和細(xì)胞內(nèi)抑制途徑來(lái)實(shí)現(xiàn)的。

Tregs細(xì)胞中的NRP1：穩(wěn)定性的守護(hù)者

NRP1在人體組織和免疫細(xì)胞亞群中的表達(dá)反映了在小鼠模型中的發(fā)現(xiàn)。最顯著的例外是Treg細(xì)胞。NRP1最初被認(rèn)為是小鼠tTreg細(xì)胞的標(biāo)記物，部分原因是它與Helios明顯共表達(dá)。事實(shí)上，小鼠Nrp1基因是Foxp3介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控的直接靶點(diǎn)，異位表達(dá)和染色質(zhì)免疫沉淀實(shí)驗(yàn)證明了這一點(diǎn)。隨后的研究表明，NRP1在血液或淋巴結(jié)中的人類外周Treg細(xì)胞上不表達(dá)。相反，健康的供體Treg細(xì)胞在體外激活時(shí)上調(diào)NRP1，表明免疫過(guò)程可能在體內(nèi)調(diào)節(jié)了NRP1的表達(dá)。盡管NRP1調(diào)控可能具有物種特異性的決定因素，但下面討論的結(jié)果表明其對(duì)Treg細(xì)胞表型和功能的影響仍然是保守的。

在癌癥的情況下，NRP1的Treg細(xì)胞表達(dá)通過(guò)至少兩個(gè)平行的途徑增強(qiáng)免疫抑制：通過(guò)充當(dāng)VEGF的共受體促進(jìn)Treg細(xì)胞向腫瘤募集，以及通過(guò)信號(hào)素－4A（Sema4a）維持腫瘤特異性Treg細(xì)胞的穩(wěn)定性。在Cd4CreNrp1L／L的NRP1敲除的小鼠腫瘤模型中，盡管大量Nrp1缺陷的Treg細(xì)胞在體外具有相同的抑制功能，但腫瘤內(nèi)CD8＋T細(xì)胞的比例和功能顯著增加。這導(dǎo)致在植入式和自發(fā)性腫瘤模型中提高了無(wú)瘤生存率并減緩腫瘤生長(zhǎng)。由于NRP1在血管生成中起到VEGFR2共受體的作用，研究表明NRP1＋Treg細(xì)胞在體外沿著VEGF梯度遷移。此外，在野生型小鼠中，通過(guò)皮下注射Vegf–／–纖維肉瘤腫瘤，與Vegf＋的腫瘤相比，在野生型小鼠體內(nèi)腫瘤生長(zhǎng)的減少可以重現(xiàn)。這些觀察結(jié)果強(qiáng)調(diào)了在腫瘤模型中，作為Treg細(xì)胞建立免疫抑制的關(guān)鍵成分，VEGF對(duì)Treg細(xì)胞的趨化反應(yīng)的重要性。

此外，除了細(xì)胞遷移外，NRP1對(duì)維持腫瘤內(nèi)Treg細(xì)胞功能和表型至關(guān)重要。通過(guò)抗體阻斷或Treg細(xì)胞特異性基因缺失（通過(guò)Foxp3CreNrp1L／L）破壞NRP1通路，阻礙了腫瘤內(nèi)Treg細(xì)胞抑制功能，從而恢復(fù)了抗腫瘤免疫，而避免了自身免疫的外周脫靶效應(yīng)。與Nrp1＋／＋野生型相比，Nrp1–／–腫瘤內(nèi)Treg細(xì)胞的Bcl2降低，活性caspase－3增加，表明生存路徑的失調(diào)。此外，Nrp1–／–瘤內(nèi)Treg細(xì)胞下調(diào)激活標(biāo)記物（包括Helios、IL－10、ICOS、CD73）而出現(xiàn)特征性T輔助細(xì)胞系標(biāo)記物（如Tbet、CXCR3、IRF－4和RORγT）。研究表明，NRP1定位于T細(xì)胞活化過(guò)程中的免疫突觸，通過(guò)磷酸酶和張力蛋白同源物（PTEN）抑制Akt（又稱蛋白激酶B或PKB）活性，從而減輕Akt介導(dǎo)的對(duì)Foxo1／3的拮抗作用，穩(wěn)定Treg細(xì)胞功能。后續(xù)研究表明，雖然腫瘤內(nèi)Nrp1缺陷的Treg細(xì)胞保留了Foxp3的表達(dá)，但出現(xiàn)促炎性表型和IFN－γ的增加，表明其抑制功能的喪失。有趣的是，Nrp1–／–Treg細(xì)胞產(chǎn)生IFNγ會(huì)引起鄰近Nrp1＋Treg細(xì)胞功能紊亂。在MC38腫瘤模型中，為了調(diào)節(jié)抗PD1的免疫治療，需要Treg細(xì)胞增加對(duì)IFNγ的敏感性來(lái)達(dá)到腫瘤清除的目的。事實(shí)上，攜帶缺乏IFN－γ受體的Treg細(xì)胞的小鼠對(duì)抗PD1不敏感。這些發(fā)現(xiàn)為進(jìn)一步研究NRP1作為治療藥物的拮抗作用提供了重要的臨床依據(jù)。

許多研究報(bào)告了癌癥患者的NRP1＋Treg細(xì)胞增多。這種Treg細(xì)胞表型在胰腺癌和結(jié)直腸癌肝轉(zhuǎn)移的外周血中也有報(bào)道。在慢性淋巴細(xì)胞白血病中，在患者血液中觀察到B細(xì)胞和Treg細(xì)胞上NRP1升高，在沙利度胺治療后減少。還有報(bào)道稱，在宮頸癌患者的腫瘤引流淋巴結(jié)（TDLN）中，NRP1＋Treg細(xì)胞增多，尤其是腫瘤轉(zhuǎn)移的TDLN。此外，人NRP1＋Treg細(xì)胞的功能更為抑制，F(xiàn)OXP3和糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的TNFR相關(guān)蛋白（GITR）在NRP1＋Treg細(xì)胞中的表達(dá)增加。有趣的是，針對(duì)VEGF結(jié)合域的NRP1拮抗劑通過(guò)誘導(dǎo)NRP1蛋白內(nèi)化，使人腫瘤內(nèi)Treg細(xì)胞抑制降低約20％。最后，還有研究報(bào)告了外周血中NRP1＋Treg細(xì)胞的升高，原發(fā)性黑色素瘤和頭頸部鱗狀細(xì)胞癌患者的腫瘤中NRP1＋Treg細(xì)胞的比率與無(wú)病生存率呈負(fù)相關(guān)。這些發(fā)現(xiàn)共同支持了NRP1＋Treg細(xì)胞在癌癥中功能增強(qiáng)的觀點(diǎn)。此外，在癌癥患者外周血中觀察到NRP1＋Treg細(xì)胞的增加。這一發(fā)現(xiàn)在IRs中是唯一的，它們?cè)谘�液樣本中的表達(dá)往往很低，可能表明循環(huán)Treg細(xì)胞上的NRP1表達(dá)可作為臨床結(jié)果的預(yù)處理或治療預(yù)后生物標(biāo)志物。

NRP1對(duì)CD8＋T細(xì)胞的影響

與NRP1在小鼠胸腺來(lái)源的Treg細(xì)胞上的結(jié)構(gòu)性表達(dá)不同，其在原始CD8＋T細(xì)胞上的表達(dá)是檢測(cè)不到的（無(wú)論是小鼠還是人類），其只在T細(xì)胞激活時(shí)才被誘導(dǎo)。CD8＋T細(xì)胞對(duì)NRP1的轉(zhuǎn)錄上調(diào)是在使用LCMV特異性（P14）TCR轉(zhuǎn)基因T細(xì)胞對(duì)CD8＋T細(xì)胞分化的早期分子和功能分析中首次發(fā)現(xiàn)的，其中NRP1轉(zhuǎn)錄在效應(yīng)CD8＋T細(xì)胞和效應(yīng)器到記憶的過(guò)渡期達(dá)到峰值。Nrp1上調(diào)與一組編碼參與T細(xì)胞遷移和粘附的蛋白質(zhì)的基因相一致，如CCR5、CD44和p－選擇素糖蛋白配體1（PSGL－1）。這就提出了一個(gè)問(wèn)題：NRP1是否也像在神經(jīng)元或內(nèi)皮細(xì)胞中一樣調(diào)節(jié)CD8＋T細(xì)胞的遷移。與這一發(fā)現(xiàn)相一致，研究人員還觀察到多克隆腫瘤內(nèi)效應(yīng)CD8＋T細(xì)胞以及激活的腫瘤抗原特異性CD8＋T細(xì)胞上NRP1表達(dá)的上調(diào)（包括轉(zhuǎn)錄和蛋白水平）。因此，TCR參與似乎是推動(dòng)NRP1在CD8＋T細(xì)胞中表達(dá)的必要條件，這是大多數(shù)已知的T細(xì)胞共受體所共有的特征。然而，盡管觀察到上調(diào)，NRP1在CD8＋T細(xì)胞早期啟動(dòng)過(guò)程中的功能作用尚不清楚。

一些早期觀察表明NRP1可能是CD8＋T細(xì)胞中的一種IR樣分子。它首先在免疫抑制的腸道CD8＋T細(xì)胞亞群（Foxp3＋CD8＋Treg細(xì)胞）以及已知與CD4＋Treg細(xì)胞相關(guān)的分子（如PD1和CD103）上被高度誘導(dǎo)。這些CD8＋Treg細(xì)胞可能通過(guò)下調(diào)T細(xì)胞的效應(yīng)器功能來(lái)維持體內(nèi)穩(wěn)態(tài)。在隨后的報(bào)告中，使用Gag特異性（TCRGag）CD8＋T細(xì)胞來(lái)了解調(diào)節(jié)CD8＋T細(xì)胞耐受性和免疫性的細(xì)胞內(nèi)在機(jī)制，經(jīng)測(cè)定，和PD1、LAG3和CTLA4一樣，NRP1優(yōu)先表達(dá)于耐受性、自反應(yīng)性CD8＋T細(xì)胞上，盡管NRP1對(duì)于耐受性是不必要的。另外的證據(jù)表明NRP1可能在T細(xì)胞功能障礙中起作用，T細(xì)胞功能障礙是指由于缺乏共刺激或持續(xù)的抗原暴露而導(dǎo)致T細(xì)胞缺乏營(yíng)養(yǎng)或衰竭。T細(xì)胞功能障礙表現(xiàn)為高IR共表達(dá)和效應(yīng)標(biāo)記物表達(dá)減少，研究發(fā)現(xiàn)NRP1屬于上述所有T細(xì)胞功能障礙狀態(tài)共有的174個(gè)基因的核心轉(zhuǎn)錄特征。

事實(shí)上，最近的一項(xiàng)報(bào)告表明，CD8＋T細(xì)胞NRP1在小鼠和人類中的表達(dá)僅限于以PD1高表達(dá)為標(biāo)志的腫瘤內(nèi)CD8＋T細(xì)胞亞群，而在PD1－瘤內(nèi)CD8＋T細(xì)胞上檢測(cè)到NRP1＋T細(xì)胞最少。與NRP1－PD1－和NRP1－PD1＋對(duì)應(yīng)物相比，NRP1＋PD1hi細(xì)胞表現(xiàn)出較高的經(jīng)典IRs（如LAG3、TIM3、TIGIT、2B4）以及與細(xì)胞增殖相關(guān)的標(biāo)記物（如Ki67）和細(xì)胞毒性（如Granzyme B）。它們還表達(dá)較高水平的耗竭相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子，如NFATc1、TOX、Blimp1和IRF4，但與細(xì)胞存活（Bcl2）和記憶／衰竭前體細(xì)胞（TCF1）相關(guān)的基因水平降低。這非常容易令人想起在慢性病毒感染和腫瘤模型中定義的“終末期衰竭”CD8＋T細(xì)胞。重要的是，NRP1在功能上參與了腫瘤內(nèi)CD8＋T細(xì)胞的終末衰竭，而不僅僅是這種功能障礙狀態(tài)的后果。具體而言，從B16F10腫瘤中回收的CD8＋T細(xì)胞經(jīng)中和抗NRP1抗體處理后，表達(dá)更高水平的穿孔素和顆粒酶B（介導(dǎo)CD8＋T細(xì)胞毒性活性的關(guān)鍵分子），并且對(duì)體外自體腫瘤細(xì)胞表現(xiàn)出更強(qiáng)的細(xì)胞殺傷作用。在同一研究中，體內(nèi)NRP1阻斷導(dǎo)致腫瘤生長(zhǎng)減少，這與PD1阻斷進(jìn)一步協(xié)同作用，盡管這種協(xié)同作用在體外沒(méi)有觀察到增強(qiáng)的細(xì)胞毒性活性。體內(nèi)和體外的差異可能是由于通過(guò)阻斷Sema3A–NRP1軸來(lái)增強(qiáng)新近激活的CD8＋T細(xì)胞的腫瘤募集。重要的是，在體內(nèi)抗NRP1方案下，除了CD8＋T細(xì)胞外，阻斷NRP1對(duì)細(xì)胞類型（如Treg細(xì)胞）也可能有貢獻(xiàn)。實(shí)際上，后者似乎得到了利用CD8＋T細(xì)胞特異性Nrp1缺陷小鼠株（E8ICreNrp1L／L）的研究的支持，這種小鼠的原發(fā)腫瘤生長(zhǎng)與野生型相似。然而，在E8ICreNrp1L／L小鼠中，還觀察到在MC38結(jié)腸腺癌模型中，Nrp1基因敲除和PD1阻斷之間存在明顯的協(xié)同作用，進(jìn)一步支持了Nrp1有助于缺陷的CD8＋T細(xì)胞介導(dǎo)的原發(fā)性腫瘤控制，盡管作用是間接的。

事實(shí)上，E8ICreNrp1L／L小鼠最顯著的表型是在術(shù)后腫瘤免疫小鼠模型中，它們對(duì)繼發(fā)性腫瘤的作用增強(qiáng)。這項(xiàng)觀察表明，NRP1在CD8＋T細(xì)胞中的主要作用可能是它有助于缺陷的CD8＋T細(xì)胞介導(dǎo)的抗腫瘤免疫記憶。具有臨床意義的是，這種模式類似于癌癥患者疾病復(fù)發(fā)的控制。進(jìn)一步的研究顯示，Nrp1–／–腫瘤內(nèi)CD8＋T細(xì)胞更能維持類似干細(xì)胞的記憶／衰竭性T細(xì)胞祖細(xì)胞表型，而不是最終衰竭T細(xì)胞表型的不可逆分化。因此，這些Nrp1–／–記憶前體形成了一個(gè)更大的腫瘤特異性記憶CD8＋T細(xì)胞池，這種情況在通過(guò)基因缺陷或抗體在阻斷任何其他IRs時(shí)都沒(méi)有報(bào)道。

與效應(yīng)CD8＋T細(xì)胞相比，NRP1在記憶性CD8＋T細(xì)胞上的表達(dá)在不同的研究中有很大差異。在急性病毒感染期間，與效應(yīng)T細(xì)胞相比，長(zhǎng)效記憶細(xì)胞的Nrp1基因轉(zhuǎn)錄下調(diào)（盡管比原始細(xì)胞高）。這種Nrp1表達(dá)下調(diào)在腫瘤特異性記憶CD8＋T細(xì)胞上更為顯著，其中Nrp1轉(zhuǎn)錄在初始細(xì)胞中降低到基線水平。與這些觀察結(jié)果相反，一份報(bào)告將NRP1描述為在非炎癥條件下通過(guò)肝竇內(nèi)皮細(xì)胞交叉呈遞抗原產(chǎn)生的肝啟動(dòng)記憶CD8＋T細(xì)胞的表面標(biāo)記物，然而，對(duì)于這些記憶性CD8＋T細(xì)胞來(lái)說(shuō)，這在功能上是不必要的。這些研究之間的差異可以部分地由產(chǎn)生功能性記憶的不同體內(nèi)條件（例如炎癥環(huán)境和抗原類型）來(lái)解釋。因此，NRP1在記憶CD8＋T細(xì)胞（其他IRs可能也一樣）上的表達(dá)是由記憶形成過(guò)程中的環(huán)境決定的。

綜上所述，NRP1在CD8＋T細(xì)胞中的進(jìn)化生物學(xué)支持了存在獨(dú)立的IRs或免疫“檢查點(diǎn)”的假設(shè)，它們分別控制腫瘤內(nèi)CD8＋T細(xì)胞的效應(yīng)和記憶功能。進(jìn)一步的機(jī)制解釋這一假設(shè)是至關(guān)重要的，希望可以提高T細(xì)胞靶向免疫治療的持久性，包括免疫檢查點(diǎn)阻斷和過(guò)繼T細(xì)胞轉(zhuǎn)移。

NRP1靶向治療腫瘤：新一代的檢查點(diǎn)分子

NRP1的臨床研究主要集中在其作為VEGFR2的共受體對(duì)腫瘤血管生成的貢獻(xiàn)上，而不是通過(guò)結(jié)合信號(hào)素或其他配體的免疫調(diào)節(jié)功能。抗NRP1單克隆抗體（MNRP1685A）的初始藥代動(dòng)力學(xué)研究表明，與抗VEGF－A的bevacizumab聯(lián)合使用，可有效抑制人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子途徑。然而，隨后在I期研究中進(jìn)行的安全性分析顯示出高水平的不良事件，最顯著的是2級(jí)或3級(jí)蛋白尿出現(xiàn)在超過(guò)50％的受試者，最終終止了對(duì)這種藥物的治療研究。最近對(duì)抗VEGFR2藥物ramucirumab的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，對(duì)Treg細(xì)胞有顯著影響，為推測(cè)NRP1功能和表達(dá)是否對(duì)觀察結(jié)果有貢獻(xiàn)留下了空間。

迄今為止，只有一種抗NRP1單克隆抗體被臨床評(píng)估其對(duì)Treg細(xì)胞功能的抑制作用。ASP1488（人IgG4，Astellas Pharma Inc．）聯(lián)合Nivolumab正在進(jìn)行Ib期評(píng)估（NCT03565445），用于晚期實(shí)體瘤患者。這項(xiàng)試驗(yàn)的結(jié)果預(yù)計(jì)將在2022年得出，這將是進(jìn)一步評(píng)估靶向NRP1的臨床意義和潛力的關(guān)鍵。免疫監(jiān)測(cè)Treg細(xì)胞和CD8＋T細(xì)胞的變化，即使是在病人的外周，也可以為治療反應(yīng)和作用機(jī)制提供信息。

除此之外，對(duì)NRP1靶向治療的潛在結(jié)果的觀察也可以間接地從研究信號(hào)素家族（涉及其免疫調(diào)節(jié)的主要NRP1配體群）的靶向治療上獲得。為此，盡管T細(xì)胞上NRP1的主要配體Sema4A尚未在臨床上被靶向，但是針對(duì)Sema3A（已知的NRP1配體）的藥物的臨床前評(píng)估已經(jīng)取得了令人滿意的結(jié)果。Sema3A被認(rèn)為是一種血管系統(tǒng)正�；�因子，它與NRPs和叢蛋白相互作用。盡管多項(xiàng)研究表明Sema3A的功能抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和遷移，但是最近一項(xiàng)針對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的研究表明，在患者衍生的異種移植（PDX）模型中，Sema3A的中和作用阻礙了腫瘤的生長(zhǎng)。這些發(fā)現(xiàn)之間的差異仍有待研究；但是，不同腫瘤類型的腫瘤血管需求和免疫浸潤(rùn)的差異可能決定了Sema3A是否具有促腫瘤或抗腫瘤功能。事實(shí)上，Sema3A內(nèi)在調(diào)節(jié)T細(xì)胞激活，因此，治療性阻斷這種相互作用可能介導(dǎo)增強(qiáng)的抗腫瘤免疫。

已有的小分子或肽拮抗劑主要針對(duì)b1結(jié)構(gòu)域與VEGF－A的相互作用，以減少腫瘤細(xì)胞的遷移和血管生成，而新的候選藥物似乎還可以在體外內(nèi)在地調(diào)節(jié)Treg細(xì)胞的功能，這種組合作用可能允許降低劑量來(lái)減輕潛在的副作用。盡管人類Treg細(xì)胞在腫瘤中選擇性地表達(dá)NRP1，使其成為一個(gè)有吸引力的腫瘤特異性免疫靶點(diǎn)，但NRP1是由造血細(xì)胞和非造血細(xì)胞亞群（包括pDCs和內(nèi)皮細(xì)胞）結(jié)構(gòu)性表達(dá)的。因此，靶向NRP1的藥物在穩(wěn)態(tài)和疾病狀態(tài)下對(duì)這些細(xì)胞類型功能的影響將進(jìn)一步確定其臨床適用性。

展望

越來(lái)越多的文獻(xiàn)表明，NRP1是癌癥免疫治療中一種獨(dú)特的免疫調(diào)節(jié)劑。在TME中，NRP1內(nèi)在地調(diào)節(jié)Treg細(xì)胞和CD8＋T細(xì)胞功能，共同阻礙抗腫瘤免疫，并與多個(gè)IRs同時(shí)表達(dá)。NRP1有利于腫瘤內(nèi)Treg細(xì)胞的功能，這主要是通過(guò)促進(jìn)它們?cè)谀[瘤床上的募集和在持續(xù)的炎癥中增強(qiáng)其功能穩(wěn)定性。惡性腫瘤患者的NRP1＋Treg細(xì)胞豐度較高，治療干預(yù)與外周Treg細(xì)胞NRP1表達(dá)降低有關(guān)。雖然NRP1對(duì)CD8＋T細(xì)胞效應(yīng)器功能影響較小，但與其他IRs相比，NRP1對(duì)記憶形成和持久反應(yīng)的影響是不同的。這些新的特點(diǎn)可能轉(zhuǎn)化為與現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)的檢查點(diǎn)抑制劑并不重疊的臨床療效，從而為聯(lián)合治療提供了有根據(jù)的理論依據(jù)。

隨著越來(lái)越多的對(duì)NRP1的免疫調(diào)節(jié)作用的關(guān)注，利用靶向NRP1來(lái)改善腫瘤治療的機(jī)會(huì)在增加，而關(guān)于NRP1基本生物學(xué)和轉(zhuǎn)化應(yīng)用的關(guān)鍵問(wèn)題仍然存在。

我們能否進(jìn)一步了解NRP1在T細(xì)胞亞群（即Treg細(xì)胞、CD4＋和CD8＋T細(xì)胞）中的分子基礎(chǔ)，特別是在人類中？這些機(jī)制的描述對(duì)于制定特定的干預(yù)策略、促進(jìn)組合免疫療法的優(yōu)化設(shè)計(jì)以及減少治療引起的免疫相關(guān)不良事件的方法至關(guān)重要。

在眾多的NRP1配體中，哪一種與腫瘤內(nèi)的Treg細(xì)胞和CD8＋T細(xì)胞最相關(guān)？這一問(wèn)題的答案將有助于明確靶向相關(guān)腫瘤相關(guān)的NRP1－配體相互作用的阻斷策略，同時(shí)保留NRP1的生理功能。

NRP1靶向治療方法能否提供新的策略來(lái)提高過(guò)繼性T細(xì)胞治療的持久性，如嵌合抗原受體（CAR）T細(xì)胞治療？在這種情況下，NRP1可能是一個(gè)可行的基因靶點(diǎn)，以克服CD8＋T細(xì)胞功能障礙，并提高體內(nèi)反應(yīng)持續(xù)時(shí)間。

NRP1拮抗劑對(duì)TME中包括APCs和間質(zhì)細(xì)胞在內(nèi)的其他細(xì)胞的功能有內(nèi)在的影響嗎？如果是這樣的話，是否有增強(qiáng)抗腫瘤免疫的作用？

與標(biāo)準(zhǔn)的免疫檢查點(diǎn)治療相結(jié)合，如抗PD1／PD－L1抑制劑，是否能達(dá)到更好的臨床療效？最佳給藥方案是什么？

人外周血T細(xì)胞（Tregs或CD8＋細(xì)胞）上的NRP1能否作為診斷腫瘤的標(biāo)志物？它能被用來(lái)確定免疫治療的最佳候選者或評(píng)估治療效果嗎？

參考文獻(xiàn)：

Neuropilin－1： a checkpoint target with unique implications for cancer immunology and immunotherapy． Trends Immunol． 2020 Jun；41（6）：493－511．